1996年，参演反腐刑侦剧《 英雄无悔 》，该剧是马少骅首次接触影视剧作品。2000年，在历史革命剧《 平民大总统 》中饰演 孙中山 ^{。2002年，在近代历史题材电视剧《 走向共和 》，饰演孙中山。2005年，参演历史剧《 汉武大帝 》 。2007年，在革命战争剧《 浴血坚持 》 。2009年，出演革命剧《 沂蒙 》 ，并凭借该剧提名第28届中国电视剧 飞天奖 优秀男演员 。}

2010年，凭借电视剧《 外乡人 》提名第25届中国电视金鹰奖最佳男演员 ^{。2011年，领衔主演史诗献礼剧《 辛亥革命 》，第三次饰演孙中山一角 。2013年，在抗日谍战剧《 一个鬼子都不留 》 。2014年，参演现代题材电视剧《 原乡 》 。2014年，为纪念邓小平诞辰110周年，在重大革命历史题材电视剧《 历史转折中的邓小平 》中饰演 邓小平 。2015年，主演丁黑执导的历史题材电视剧《 冯子材 》 。2016年，参演李雪执导的医疗题材都市剧《 外科风云 》 。2017年，主演主旋律文艺电影《 匠心 》 。}

2022年11月，获得第31届中国电视 金鹰奖 最佳男配角奖。 ^[146]

2023年，参演的革命历史剧《 战火中的青春 》播出 ^[154] 2008年，在主旋律题材电视剧《 红灯记 》中饰演一号反面人物日本军官鸠山，这是马少骅第一次饰演反面人物 ^{；同年，与 赵峥 共同主演年代商界传奇剧《 当家大掌柜 》饰演一个忠义立身、充满东方式智慧的史大掌柜肖子富 [29-30] ；同年，在梅花党系列谍战剧《 秘密列车 》中饰演周明天；随后，出演宁浩执导的喜剧电影《 疯狂的赛车 》，在影片中饰演扮演黄渤饰演的耿浩的师父 。}

2009年，与 李亚鹏 主演抗战剧《 关中枪声 》，在剧中饰演一个在当时陕西学界、政界颇有影响的人物梁守道 ^{；同年，出演再次与 管虎 合作，主演革命剧《 沂蒙 》，并凭借该剧中的李忠厚一角提名第28届中国电视剧飞天奖优秀男演员 ；随后，在电视剧《 好大一棵树 》中饰演“100位新中国成立以来感动中国人物”之一的邓平寿 。}

2010年，主演由管虎编剧并执导的，现代都市生活题材电视剧《 外乡人 》，在剧中饰演脾气粗暴急躁爱算计，但是为人仗义的谢长发一角，并凭借该角色提名第25届中国电视金鹰奖最佳男演员 ^。

2011年，主演纪念辛亥革命100周年的史诗献礼电视剧《 辛亥革命 》，又一次饰演孙中山 ^{，并凭借该角色提名第29届中国电视剧飞天奖优秀男演员；同年，参演由 张黎 、 刘淼淼 共同执导的展示中国崛起的坎坷与曲折的战争历史题材电视剧《 圣天门口 》 ；同年，参演由 韩三平 执导，为庆祝中国共产党建党九十周年而制作的献礼影片《 建党伟业 》，饰演首任临时大总统孙中山先生 。}

2013年，与 于震 等人共同主演抗战剧《 一个鬼子都不留 》，在剧中饰演山西杂耍班班主，庄继宗的结拜大哥,游击队队员，后为救庄继宗而死的李占魁一角 ^[36-37] 。

2014年，在 刘烨 、 陈宝国 主演的电视剧《 北平无战事 》中饰演林大潍一角；同年，与 张国立 、 陈宝国 共同主演电视剧《 原乡 》，在剧中饰演老兵杜守正 ^{；随后与 萨日娜 共同主演重大革命历史题材电视剧《 历史转折中的邓小平 》中饰演 邓小平 ，得到了邓小平子女的肯定，并凭借该剧获得第18届北京影视春燕奖最佳男主角奖和第21届上海电视节-白玉兰奖杰出贡献奖等荣誉 ；同年，与 佟大为 、 关悦 合作主演电视剧《 我的儿子是奇葩 》，在剧中饰演楚三福 。}

2015年，主演 丁黑 执导的历史题材电视剧《 冯子材 》在剧中饰演清末将领、民族英雄冯子材 ^{；同年，再度与萨日娜合作出演由 于荣光 执导的真人真事改编的纪实片《 独龙之子高德荣 》 。}

2016年，主演由 罗灿然 执导的亲情励志题材电视剧《 搭错车 》，马少骅在剧中饰演了一位以卖破烂为生，将自己的一生都奉献给了收养的女孩阿美的哑父，该剧收视率获得全网第一的好成绩 ^{；同年，参演由 李雪 执导的医疗题材都市剧《 外科风云 》，在剧中饰演仁合医院的院长傅博文一角 。}

2017年，主演文艺电影《 匠心 》，饰演性格孤傲冷僻的著名木雕工匠陆明松 ^。

2019年8月，参演革命历史剧《 我们的西南联大 》 ^{；9月，主演历史电视连续剧《 民为天之丁宝桢 》 。}

2020年5月1日，参加央视五一晚会，与刘佩琦、吴京安、侯勇、倪大红、刘劲共同演绎了一首诗朗诵《向胜利进军》 ^{；11月27日，参加由 中央广播电视总台 文艺节目中心制作推出的首档大型情感户外真人秀《 走在回家的路上 》录制 。}

2021年1月8日，主演的电视剧《 国家情怀 》正式杀青 ^{；2月1日，出演的电视剧《 觉醒年代 》播出， 饰演 蔡元培 ； 5月15日，联合主演的重大历史革命题材电视剧《 中流击水 》在 CCTV1 、央视频同步播出 。5月25日，出演重大革命历史题材剧《 光荣与梦想 》 。6月18日，参演电影《 守岛人 》上映 。7月1日，参演电影《 革命者 》上映； 参演电视剧《 锦心似玉 》； 参演电视剧《 理想照耀中国 》 ；12月17日，的建党百年献礼影片《 一件棉袄 》上映 。}

2022年1月28日，参演现实主义题材大剧《 人世间 》播出，饰演郝省长 ^{；8月1日，主演的长篇现实重大题材电视剧《 运河边的人们 》播出，饰演梁家轩 [75-76] 。同年参演电视剧《 八月桂花开 》播出 。 [141] 11月6日，参加第14届金鹰节颁奖晚会。 [143]}

2022年11月6日，获得第31届 中国电视金鹰奖 最佳男配角奖。 ^[146] 11月15日，参演的电视剧《 山河锦绣 》播出。 ^[147]

2023年3月17日，入选第三届 新时代国际电视节 斑彩螺奖颁奖典礼专家评委名单； ^[150] 4月23日，参演的青春励志革命历史剧《 战火中的青春 》上映，在剧中饰演冯友兰 ^[153-154] 。

马少骅在《 搭错车 》里扮演的的哑爸用手语说话，乍看有点儿怪异，但是当沉浸在剧情中的时候就觉得手语比口语传递的信息更多。在《 沂蒙 》中，马少骅饰演的农民李忠厚，是沂蒙大地上长出的一棵朴实的麦苗；在《历史转折中的小平》中，他扮演的小平，演绎出拨正历史航船中的舵手的坚毅；在《 走向共和 》中，将站在时代潮头上的孙中山塑造得大义凛然。一个哑爸，则将他与塑造的其他角色区别开。能演顶天立地的大人物，也能演默默生存的小人物；能演滔滔不绝的演说家，也能演哑口无言的捡破烂的。不断突破自己,提升自己，有着梦想上的纯粹，有着定力上的坚硬，有着情怀上的柔软，这才是好的演员。 （ 新华网 评 ^）

马少骅身上所拥有的耿介的性格使然，他始终怀着对年轻人的一份责任。 （ 中国共产党新闻网 评 ^）

马少骅表示，做一个真善美的人是好演员的标准，作为老艺术家，他更要身体力行，以身作则，为行业树新风，展形象起带头作用。 （光明网评 ^[152]