3. 讨论

合适的动物模型对于SAA的发病机制及治疗方案的研究非常重要，免疫介导的BMF模型是最接近SAA患者发病机制的动物模型 ^{[ 5 - 6 ]} 。目前国内外大多采用辐照结合淋巴细胞输注的方法建立免疫介导的BMF动物模型。国外报道多采用γ射线辐照，具体细节没有统一的标准，在国内γ射线主要用于特殊类型肿瘤放疗，因辐照过程需要特殊设备和防护，较少应用于医学实验研究；在国内X射线更为常见和更易满足辐照条件，但是关于采用X射线辐照建立BMF模型尚未见文献报道，故我们通过对X射线剂量的探索，以期建立适合实验研究的免疫介导BMF模型。在14 d后不同剂量X射线照射的模型小鼠外周血三系和骨髓有核细胞均明显减少；骨髓病理可见脂肪空泡、骨髓细胞性明显降低、巨核细胞缺如；肾、肝、肠没有明显的淋巴细胞浸润；说明C57小鼠经亚致死剂量X射线照射后，输入MHC不相容的淋巴细胞可成功建立BMF模型，无移植物抗宿主病发生 ^{[ 8 , 16 ]} 。由于小肠对射线高度敏感，在造模过程中出现肠粘膜损伤，可能与辐射后肠粘膜炎症和应激反应诱导的上皮干细胞和内皮细胞凋亡有关 ^{[ 17 - 19 ]} 。

在14 d后不同辐照剂量组的模型小鼠外周血三系和骨髓有核细胞明显下降，随X射线剂量的增加，外周血三系和骨髓有核细胞下降越明显，说明BMF程度与X射线剂量呈剂量依赖效应。6.5 Gy X射线组模型小鼠骨髓病理显示未见有核细胞，该亚致死剂量已达到清髓效果，死亡率达50%，不利于模型小鼠后续实验研究；然而低剂量组5.0 Gy X射线辐照模型小鼠，与6.5 Gy、5.75 Gy剂量组相比，BMF程度较轻，存活率提高，有利于免疫介导BMF模型的发病机制及治疗方案研究。

川芎嗪是从中药川芎中提取出来的活性生物碱，临床上广泛应用于心脑血管、呼吸系统及肾脏等疾病治疗，研究证实其具有扩张血管、改善微循环、抑制血小板聚集、抗氧化应激反应等作用 ^{[ 20 ]} ，也有研究报道川芎嗪能促进损伤后骨髓微循环修复和造血功能重建 ^{[ 13 - 14 , 21 - 22 ]} 。在我们实验中观察到小鼠经5.0 Gy X射线辐照及淋巴细胞输注造模后，给与川芎嗪治疗14 d，骨髓病理显示骨髓充血明显减轻、有核细胞增加，外周三系出现上升，随川芎嗪剂量的增加，骨髓改善越明显，表明川芎嗪对BMF小鼠骨髓造血微环境和造血功能修复有一定促进作用，也在一定程度上体现中药川芎的“活血祛瘀”的功效，并进一步拓展了“祛瘀生新”的理论 ^{[ 33 -34]} 。Fas作为一种死亡受体，其与配体FasL结合后可诱导表达Fas的细胞凋亡，并且Fas介导的细胞凋亡是导致骨髓细胞破坏的主要途径 ^{[ 25 ]} ，我们实验发现川芎嗪可降低骨髓衰竭小鼠Fas表达，表明川芎嗪可能通过调节细胞凋亡信号来参与骨髓修复 ^{[ 26 ]} ，也可能与川芎嗪上调骨髓基质细胞bFGF、bFGFR表达 ^{[ 21 , 27 ]} ，及促进造模后骨髓氧自由基的清除、DNA损伤修复有关 ^{[ 15 , 28 - 29 ]} 。

综上所述，采用亚致死剂量X射线照射联合同种异体淋巴细胞输注，可成功建立免疫介导的BMF模型，在该模型中亚致死剂量X射线辐照可导致受体小鼠骨髓损伤和免疫功能下降，同种异体淋巴细胞输注诱导的免疫反应进一步加重骨髓造血细胞破坏 ^{[ 30 - 32 ]} 。5.0 Gy X射线辐照组骨髓损伤程度相对较轻，存活率较高，有利于免疫介导的BMF模型实验研究。在该模型中BMF程度除了与辐照剂量及剂量率有关，也与受体小鼠的种类、年龄、性别、营养等一般情况有关 ^{[ 32 - 33 ]} 。川芎嗪治疗后模型小鼠骨髓造血功能改善，提示川芎嗪可用于SAA等骨髓衰竭疾病的治疗研究，也进一步拓展了“祛瘀生新”理论。

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国家自然科学基金（81573706）

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References