2.2 前处理条件的优化

2.2.2 净化条件的优化

MAX萃取柱适合分离纯化弱酸性化合物,鉴于谷维素弱酸、弱极性的特点,采用MAX萃取柱净化提取液。首先用5.0 mL甲醇和1%氨水活化MAX萃取柱,以30%、40%、50%、80%甲醇水溶液(含1%氨水)作为上样溶剂分别配制5.0 mL质量浓度为100 μg/L的混合标准溶液上样,通过3种谷维素的穿透率,考察甲醇体积分数对3种谷维素在MAX萃取柱穿透率的影响。结果如 图2 所示,当上样液为30%甲醇水溶液(含1%氨水)时,3种谷维素穿透率均<1%,随着甲醇体积分数的增加,穿透率逐渐升高,为确保3种谷维素能完全吸附于MAX萃取柱,确定上样溶剂为30%甲醇水溶液(含1%氨水)。

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图2

不同甲醇体积分数的上样溶剂对3种谷维素 穿透率的影响( n =3)

Influence of loading solvents with different volume fractions of methanol on the penetrability rates of the three oryzanols (n=3)

同时为保证3种谷维素能被完全洗脱,考察含1%、2%、4%、5%甲酸的甲醇洗脱液对回收率的影响。由 图3 结果表明,3种谷维素的回收率随着甲酸体积分数的增加表现为先升高后下降的趋势,当甲酸体积分数为4%时,3种谷维素几乎被完全洗脱,回收率为95.5%~100.4%。因此选用含4%甲酸的甲醇为洗脱液。

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图3

不同甲酸体积分数的洗脱液对3种谷维素 回收率的影响( n =3)

Influence of eluents with different volume fractions of formic acid on the recoveries of the three oryzanols (n=3)

2.3 基质效应

基质效应是指在样品测定过程中,由于待测物以外其他物质的存在或其他物理、化学因素直接或间接影响离子化效果,从而影响待测物响应强度的现象 ^{[ 23 ]} 。本实验采用1.3节前处理方法分别制备未净化的样品溶液和净化后的样品溶液,分别以甲醇、未净化的样品溶液和净化后的样品溶液为溶剂,配制溶剂标准曲线和基质标准曲线,通过公式ME=(基质标准曲线的斜率/溶剂标准曲线的斜率-1)×100%计算3种谷维素的基质效应,以评价基质中杂质对分析物的影响 ^{[ 24 ]} 。由 图4 可知,未净化前CA-FA的ME为53.1%表现为基质增强效应,24MCA-FA的ME为-22.0%表现为基质抑制效应;净化后,3种谷维素ME为1.6%~10.8%,样品的基质效应减弱,表明样品基质对分析物的影响较小。

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图 4

稻米中3种谷维素在净化前、后的基质效应

Matrix effects of the three oryzanols in rice before and after the purification

2.4 标准曲线、相关系数、检出限和定量限

将3种谷维素配制成系列浓度的标准工作液,以待测物峰面积为纵坐标,质量浓度(μg/L)为横坐标绘制标准曲线。结果如 表3 所示,Camp-FA、CA-FA在1.0~500.0 μg/L和24MCA-FA在5.0~1000.0 μg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数( r ² )均≥0.9983。以3种谷维素定量离子色谱峰的信噪比( S/N )为3和10计算检出限(LOD)和定量限(LOQ)。结果表明,3种谷维素的LOD为0.5~1.0 μg/L, LOQ为2.0~3.5 μg/L。

2.5 加标回收率和相对标准偏差

谷维素在稻米中本底含量相对较高,为进一步验证该方法测定稻米中3种谷维素的可行性,所以选择3种谷维素本底含量较少的稻米品种(扬粳722)进行加标回收试验。加标水平为稻米中3种谷维素本底含量的2、5和10倍,经1.3节步骤前处理,每个水平重复测定3次。由 表4 结果可知,3种谷维素的平均回收率为86.1%~110.6%,相对标准偏差为0.9%~3.2%,表明本方法具有良好的准确度和精密度。